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PCR试剂盒（教学用）
常规PCR发展到如今已经是非常成熟，对于大多数的科研人员来说，买TAQ酶和dNTP就可以，而如果为省事，可以直接买PCR MasterMix。而本试剂盒从PCR的原理来让学生学会PCR。本试剂盒带有模板和引物，可以产生500bp的单一条带。
试剂盒组成：
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试剂盒组成 |
50次 |
500次 |
储存条件 |
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Taq Polymerase(5U/ul) |
50ul |
500ul |
-20℃ |
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10×PCR Buffer |
1ml |
5ml |
-20℃ |
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MgCl2(25mM) |
1ml |
5ml |
-20℃ |
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模板（1ng/ul） |
100ul |
1ml |
-20℃ |
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上游引物(10mM) |
100ul |
1ml |
-20℃ |
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下游引物(10mM) |
100ul |
1ml |
-20℃ |
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ddH2O（PCR用） |
2ml |
25ml |
-20℃ |
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6×DNA Lodding Buffer |
1ml |
1ml |
-20℃ |
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500bp对照（50ng/ul） |
100ul |
1ml |
-20℃ |
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说明书 |
1份 |
1份 |
RT |
保存说明：10×PCR Buffer、MgCl2(25mM)、ddH2O（PCR用）在2-8℃保存一个月对实验无影响，500bp对照、模板和引物在2-8℃保存一周对实验无影响。微量试剂打盖前请离心。
自备试剂：琼脂糖，电泳缓冲液，核酸染料（如EB，goldveiw等）
操作步骤：
按照下面的量加入试剂：可一次配50ul，或者一次配更多的量，如500ul，混匀再分成50ul一管。一般Taq Polymerase最后加入。
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加入试剂 |
加入量总50ul |
加入量500ul |
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ddH2O（PCR用） |
37ul |
370ul |
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10×PCR Buffer |
5ul |
50ul |
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MgCl2(25mM) |
4ul |
40ul |
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模板（1ng/ul） |
2ul |
20ul |
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上游引物(10mM) |
2ul |
20ul |
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下游引物(10mM) |
2ul |
20ul |
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Taq Polymerase(5U/ul) |
1ul |
10ul |
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总体积 |
50ul |
500ul |
混匀。
按照下面的条件设置反应
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温度 |
时间 |
循环次数 |
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94℃预变性 |
3min |
1 cycles |
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94℃变性 |
30sec |
30 cycles |
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54℃退火 |
30sec |
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72℃延伸 |
500-2000bp/1min |
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72℃终延伸 |
5min |
1 cycles |
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反应完降温到25℃ |
反应完后，取5ul产物，加入1ul 6×DNA Lodding Buffer 混匀电泳检测。可同时在两测跑一个500bp的对照。（1.5%的胶可以得到理想的结果）
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