福尔根(Feulgen)染色液说明书

反应原理：

DNA 经酸（1mol/L HCl）水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与 Schiff 试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有 DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基（醌基是一个具有颜色的发色团），所以含有 DNA 的部位，呈紫红色。而RNA用此法处理后则分解。

保质期：2-8℃避光6个月。

操作步骤

本染色液采用经典方法配制，染色方法可参考文献或者实验室留传下来的方法，或者参考下面的方法。

处理准备标本，同时准备60℃的１Ｍ的盐酸溶液。

１．切片脱蜡入水(洋葱表皮等类似标本，固定，梯度乙醇后入水)。

２．切片放入60℃的 1M的盐酸溶液中约5-15分钟(水解时间因标本及固定液不同而有差异，)。

３．滴加或者浸入Schiff试剂，反应30-60分钟（此步为避光反正，最好在通风处，用完试剂请马上盖严）。

４．吸干或者甩去Schiff试剂（如果不用重亚硫酸盐溶液洗，此步可直入水冲洗）

５．用重亚硫酸盐溶液清洗,，用完盖严（一般此步可省，直接用蒸馏水洗）。

６．在蒸馏水中充分冲洗。

7．封片（要保存染色结果，请经酒精脱水，二甲苯透明并封片）。 如果只简单的立刻观察，可直接在有少量水的情况下压片。显微镜观察。

注意事项

1．此试剂为接到订单后我公司再配制，保质期一般为6个月。但因为经常开盖等原因造成SO2流失，试剂保质期会变短，如果染色结果不佳，可适当加入少量重亚硫酸钠（钾），加入量一般为0.1g/L

2．虽然Feulgen法是DNA的特异染色方法，但如果延长水解时间并在室温下进行反应， Schiff试剂也与醛、酮、醇和缩醛磷脂起反应，因此用Feulgen法检测DNA时必须严格控制盐酸水解的时间和温度。为减少假阳性和非特异性染色必须做对照实验。

３．由于Schiff试剂能与醛基结合，故不能用含醛的固定液固定组织，常用Carnoy固定液。Bouin液不适用于Feulgen反应，因为固定液中含较多的酸，可将DNA水解，影响染色反应。