酵母线粒体提取试剂盒   百浩天生物科技有限公司
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 蛋白质研究 >> 蛋白提取 >> 酵母线粒体提取试剂盒
  
货  号:
P0047
名  称:
酵母线粒体提取试剂盒
规  格:
50T/100T
价  格:
960/1780
CAS  #:
酵母线粒体提取试剂盒
 一,试剂盒组份
组份
P0047(50T)
P0047 (100T)
蜗牛酶
500mg
1g
山梨醇缓冲液
30ml
60ml
原生质体裂解液
100 mL
200 mL
β-巯基乙醇
1.0ml
1.0ml
线粒体清洗液
25 mL
50 mL
线粒体保存液
5 mL
10 mL
二,说明
本试剂盒可用于从酵母中分离出完整而纯化的线粒体。其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。
三,保存条件
本试剂盒三个月内使用可4℃储存,长期可置-20℃。
四,操作步骤
1.取新鲜培养的1-5ml酵母培养物(不超过5×107细胞,湿重50mg或者50ul体积)离心后的收集物(4℃,1000× g 离心5 min)。双蒸水洗一到两次。离心,尽量弃上清。取50ul山梨醇缓冲液洗一次,离心,弃上清。
2.酵母沉淀用0.5ml山梨醇缓冲液重悬,加入10mg蜗牛酶,再加入5ul β-巯基乙醇,混匀(如果一次提取样本较多,可取0.5ml山梨醇缓冲液重悬,加入10mg蜗牛酶,再加入5ul β-巯基乙醇预混匀,混匀后每管样本加入0.5ml重悬酵母),30℃水浴1-2小时。4℃,1000× g 离心5 min,弃上清,得到原生质体。将得到的原生质体用0.5 ml原生质体裂解液重悬,再次离心,弃上清,得到原生质体。
3.将得到的原生质体用0.5 ml原生质体裂解液重悬,并转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨10~20次;
4.将研磨物放置合适的离心管,4℃,1000× g 离心5 min;
5.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 16,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL 线粒体清洗液重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min;
7.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 16,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
8. 用50 -100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事项:
1. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
2. β-巯基乙醇有毒,请注意通风及防护。

一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
G1.11×(10-5)×R×[rpm]
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
 [rpm] 即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
点击数:724  修改时间:2019-1-3 【打印此页】 【关闭
 
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