血液线粒体提取试剂盒   百浩天生物科技有限公司
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 蛋白质研究 >> 蛋白提取 >> 血液线粒体提取试剂盒
  
货  号:
P0046
名  称:
血液线粒体提取试剂盒
规  格:
50T/100T
价  格:
840/1280
CAS  #:
血液线粒体提取试剂盒
 一,试剂盒组份
组份
P0046 (50T)
P0046 (100T)
红细胞裂解液(10X)
100ml
100ml*2
白细胞裂解液
50 mL
100 mL
线粒体清洗液
25 mL
50 mL
线粒体保存液
5 mL
10 mL
二,保存条件
本试剂盒三个月内使用可4℃储存,长期可置-20℃。
三,说明
本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。
其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。
四,操作步骤
1. 血液处理:
血液要求:非肝素钠抗凝血,最好使用新鲜血液。对于陈旧血液,由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤,所以线粒体得率会大大减少,并且完整性也会降低。
a. 对于无核红细胞全血(如哺乳动物处周血),取血约5ml(适当分成几管),加入3倍体积的红细胞裂解液(稀释后的工作液,下同),混匀,800 × g  5 min离心收集白细胞。加入1-2ml红细胞裂解液(稀释后的工作液),吹打重悬白细胞,合并于一管中,800 × g 5~10 min离心收集白细胞。此时如果白细胞有可见红色,可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次。
b. 对于有核红细胞全血(如禽类全血),取约200-300ul全血,800 × g 5~10 min离心收集全细胞,用生理盐水或者PBS清洗两次,留沉淀去上清。清洗时请用去尖吸头吹打。
2. 在收集到的细胞中,加入1.0 mL冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨20~40次;
3. 匀浆物转移到离心管,4℃,1000× g 离心5 min;
4. 取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000× g 再次离心5 min(一共两次离心,完整去核)。
5.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;
6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL 线粒体清洗液重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min(再次去核);
7.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
8. 用50 -100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事项:
为保证获得完整及尽可能多的线粒体,匀浆条件要示:第一是全程低温操作。第二是快速。第三,如有条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。
 
一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
G1.11×(10-5)×R×[rpm]
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示; [rpm] 即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
点击数:570  修改时间:2019-1-3 【打印此页】 【关闭
 
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