动物组织内质网提试剂盒   百浩天生物科技有限公司
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 蛋白质研究 >> 蛋白提取 >> 动物组织内质网提试剂盒
  
货  号:
P0060
名  称:
动物组织内质网提试剂盒
规  格:
20T/50T/100T
价  格:
780/1480/2160
CAS  #:
 一,试剂盒组份
组份
P0060 (20T)
P0060 (50T)
P0060 (100T)
5×Lysis Buffer
20 mL
50 mL
100 mL
2.5M CaCl2
6mL
15mL
30mL
Store Buffer
6mL
15 mL
30mL
二,说明
本试剂盒可用于从动物组织中分离出内质网。提取内质网一般有密度梯度离心、氯化钙沉淀和超速离心等方法,本试剂盒采用氯化钙沉淀法提取。此方法操作简单,对离心机要求不高,所得内质网纯度一般。因为内质网含量少,提取困难,要求样本量大,一般不适用于从培养细胞中提取。
三,操作步骤
准备工作:将5×Lysis Buffer用双蒸水稀释成1×Lysis Buffer(1体积5×Lysis Buffer加入4体积的水混匀,稀释后可保存一个月),根据用量,将2.5M CaCl2稀释成8mM CaCl2(取320ul浓缩液稀释成100ml,现配现用,保存不超过48小时),将稀释好的1×Lysis Buffer和8mM CaCl2  2-8℃存放。准备冷的PBS或者生理盐水。
1. 样本处理及匀浆:称取1g左右新鲜组织如肝脏、心肌等,切成不超过3mm厚片以方便清洗,用冷的PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块,放入玻璃匀浆器内,再加入1 mL冰预冷的1×Lysis Buffer,冰上研磨组织40次左右,到看不见明显碎块,也可用组织研磨仪处理样本(可一次性将5ml 1×Lysis Buffer都加入),但处理条件请自行摸索,原则是尽量多破细胞膜而少破亚细胞膜,在其中找到平衡。
2. 将匀浆物转移到合适的离心管,再加入4ml预冷的1×Lysis Buffer,混匀。如果用研磨仪处理,可一次性将5ml 1×Lysis Buffer都加入。
3. 4℃,1000× g离心5 min,沉淀中主要为细胞和细胞核。
4.取上清(如果最上层有少量脂肪,可小心吸取脂肪丢弃,再取上清),加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。沉淀有线粒体,可从中提线粒体蛋白。
5.将上清测体积并转移到合适的烧杯中,边搅拌边慢慢加入8体积的预冷的8mM CaCl2,加完后再次4℃搅拌15 min。
6. 将上步的混合物分装入合适的离收管中,4℃,8000× g 离心10 min。
7.弃上清,内质网在沉淀中。
8. 用100-300μL Store Buffer 或合适的缓冲液重悬内质网沉淀,立即使用或-70℃保存。
:如果实验室有条件,可以从第4步结束后的上清,采用100 000× g(十万G)  4℃离心60 min也可得到内质网沉淀,两种方法得到的内质网组分并不完全相同。
四 注意事项:
1. 为保证获得完整的内质网,第一是全程低温操作。第二是快速。第三,在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备内质网的比较关键环节。
2. 本试剂盒可以等比减少样本和试剂用量,比如一次用100mg样本,各试剂只用到十分之一,但结果可能是内质网提得的量特别少,以至后期实验无法展开。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解内质网。
五 储存:本试剂盒可4℃储存一年。
点击数:506  修改时间:2022/3/3 【打印此页】 【关闭
 
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