Bradford蛋白浓度测定试剂盒

本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔，如果是1ml比色皿时可做500孔。 

产品简介：

考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明：

一，微孔酶标仪法

1.        完全溶解蛋白标准品，取10ml，加240ulPBS稀释至250ml ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

2.        5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml  5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.        将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。

4.        将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

5.        各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。

6.        用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。

7.        根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二，分光光度计法

如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

步骤如下：

1，取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。

2，取100ulBSA，加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。

3，5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml  5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4，按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来润洗比色皿)

离心管号	1	2	3	4	5	6	7（样品管1）	8（样品管2）	9（样品管3）
标准蛋白BSA	0	100ul	200ul	300ul	400ul	500ul	500ul适当稀释的样品1	500ul适当稀释的样品2	……
PBS	500ul	400ul	300ul	200ul	100ul	0	0	0	0
1×G250染色液	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml

5，反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表。

离心管号	1	2	3	4	5	6	7	8	……
加染色液（分钟）	0	2	4	6	8	10	12	14	……
测OD值	3	5	7	9	11	13	15	17	……