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一、苏木素的种类及其配制法

苏木素是一种天然染料，它的获得是从苏木素的树心提炼而成的，市售略带浅褐色结晶，易溶于酒精和甘油，较难溶于水，需加热才能溶解。苏木素产生于墨西哥的坎佩切，国内使用的几乎都为进口。

苏木素作为单一的染色是不行的，它染色力弱，必须具备两个条件才能具有强的染色力。一是产生有效成分苏木红，二是加入媒染剂。苏木红的产生需经氧化才能获得，获得苏木红有两种方法，一是天然成熟，苏木素与其它试剂混合好后，暴露于阳光或亮处，在自然光的作用下，慢慢地氧化成熟，但时间较长，一般需四周左右。二是加入化学试剂促进成熟，如加入黄色氧化汞或碘酸钠促使苏木素成熟。快速成熟的苏木素溶液有的可马上使用如Mayer氏苏木素，有的则需隔天使用。

苏木素种类较多，用法各异，有的用于常规染色，有的则用于特殊染色。

（1）明矾苏木素

1．Harris氏苏木素（1990）

苏木素               2.5g

无水酒精             25ml

硫酸铝钾（钾明矾）   50g

或硫酸铝铵（铵明矾）

蒸馏水              500ml

黄色氧化汞          1.25g

冰醋酸              20ml

该溶液为当前最广泛使用的染液，由于它染色时间短，效果好，很受使用者的欢迎。

配制时，先将苏木素溶于酒精（平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好，贮存备用），取一2000ml的三角烧瓶，倾入钾明矾，加入蒸馏水，于电炉上加热，熔解钾明矾，完全熔解后，待温度至90℃左右时，加入预先溶解好的酒精苏木素，继续加热至沸腾，延续3-5min，此时溶液逐渐加深，变为紫红色，拔离电源，加入黄色氧化汞，当充分氧化后，重新插上电源继续加热3-5min，此时溶液变深紫色，拔去电源，直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里，放于暗处，第二天过滤后加入冰醋酸，即可使用三个月，但据我们的实践及多年的经验认为，只要掌握好切片的“无水化”，该染液可反复使用达一年之久（天天使用）。

注意事项：

①苏木素一定要预先溶解，否则较难彻底溶解。

②加入黄色氧化汞后，可产生大量的气泡，因此，配制500ml的溶液，一定要选择2000ml以上的容器，否则液体便会溢出。

③当溶液变为深紫色后，应终止氧化，烧瓶应直接插入冰水中，不要担心玻璃瓶会爆裂，因三角烧瓶经特殊处理的，不会有爆裂的危险，如果有，那是属于产品质量问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化，以免缩短溶液的使用寿命。

④溶液过滤后方加入冰醋酸，不要颠倒过来。如果加入冰醋酸后再过滤，过滤速度将非常慢，这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀，增加了密度，使溶液不易通过，导致过滤时间延长。

⑤该苏木素在使用一段时间后，可以在表面产生金属膜。当出现这种现象时，可用粗滤纸捞去，否则贴于切片上将较难除去。

⑥苏木素加入冰醋酸后，其PH值在2－2.28之间。

2．Mayer苏木素（1903）

苏木素            0.1g

蒸馏水            100ml

硫酸铝钾             5g

柠檬酸             0.1g

水合氯醛             5g

碘酸钠             20mg

该试剂有的单位用作常规切片的染色，用它染核不会过染，时间可在20min至30min，核染色质清晰可见，核呈灰黑色，可用作特殊染色核的对比染色试剂。如果先用天青石蓝为媒染剂，染色时间可在2-3分钟完成。

配制溶液时，先将蒸馏水稍加温，加入苏木素并不停搅拌直至完全溶解，继而加入硫酸铝钾，令其充分溶解后，加入柠檬酸和水合氯醛，继续搅拌均匀，全部溶解后再加入碘酸钠，搅拌均匀，此时溶液的颜色变为深棕色，过滤后即可使用。

3．Ehrlich氏苏木素（1886）

苏木素              1g

无水酒精           50ml

甘油               50ml

硫酸铝钾          7.5g

蒸馏水             50ml

冰醋酸             5ml

将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。该液 量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。但染色时间较长，需要20分钟以上。

如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。

4．Carazzi氏苏木素（1911）

苏木素            0.5g

甘油             100ml

硫酸铝钾           25g

蒸馏水           400ml

碘化钾            0.1g

将苏木素溶于甘油，硫酸铝钾溶于300ml的蒸馏水中搅拌至完全溶解后，混合两液，将碘化钾溶于剩余的100ml蒸馏水中，加温到溶解后，混合于上述的混合液中，搅拌均匀，过滤后即可使用，染色时间10min左右，配成后的液体可保存半年左右。

5．Cole氏苏木素（1943）

苏木素                           1.5g

饱合硫酸铝钾水溶液               700ml

碘酒（1克碘溶于95%酒精99ml中）  50ml

蒸馏水                           250ml

将苏木素溶于加温的蒸馏水中，然后加入碘酒溶液，继而加入饱和硫酸铝钾溶液，混和均匀后加热，直至沸腾，将瓶子插入预备的冰水中，如同配制Hari氏苏木素一样，第二天过滤，即可使用，染色时间为20min以上。

（2）铁苏木素

1．Weigert氏铁苏木素

A液：      苏木素        1g

           无水酒精   100ml

将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。

B液：       29%三氯化铁水溶液       4ml

             蒸馏水                 95ml

             盐酸                    1ml

临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试剂便过分氧化而失效。因此，每次使用，需要多少配制多少，采取一次性用完，以免造成浪费。该染液具有抗弱酸的能力，因此，常用于某些特殊染色核的染色，染色时间为20-30分钟。

2．Heidenhain氏铁苏木素（1896）

A液：        苏木素      0.5g

              无水酒精    10ml

              蒸馏水      90ml

将苏木素溶于无水酒精，然后再加入蒸馏水，放置四周后便可成熟。

B液：         硫酸铁铵         5g

              蒸馏水         100ml

这种铁苏木素可以显示多种物质如：横纹肌、髓鞘、线粒体、细胞核等，可被染为深灰色至黑色。

（3）钨苏木素

磷钨酸苏木素（PTAH）

苏木素　　　　0.5g

磷钨酸        5g

蒸馏水        500ml

取300ml蒸馏水来溶解苏木素，其余的蒸馏水溶解磷钨酸，然后两者混合在一起，搅拌均匀后放于亮处，约四周左右才可成熟使用。

该试剂可以显示多种物质，如：横纹肌、神经胶质细胞、纤维、纤维素、髓鞘、胶厚，和细胞浆等，染色时间24小时以上。

这种试剂配成后，可连续使用达数年时间。

（4）钼苏木素

磷钼酸苏木素（Thomas, 1941）

A液：　苏木素　　　　2.5g

       二噁烷　　　　49ml

       过氧化氢      1ml

B液：　磷钼酸        16.5g

　　　 蒸馏水　　　　44ml

　　　 二甘醇　　　　11ml

将B液过滤，取滤液50ml加到A液中去，充分混合后，可见该试剂为深紫色，放置24小时后，才可使用。染色时间2分钟。它可显示的物质为：胶原及粗的网状纤维；亲银细胞；核、Daneth氏细胞等。

（5）铅苏木素（Solcia等，1969）

硝酸铅苏木素

A液：　1.5克苏木素溶于10ml　95%酒精中，取　1.5ml

　　　　硝酸铅贮存液　　　　　　　　　　　　10ml

        蒸馏水                           10ml

混合上述液体，搅拌均匀后，静置30分钟后过滤。

B液：　5%硝酸铅水溶液　　　　　　　　　　　 50ml

        饱和醋酸铵水溶液                  50ml

混合两液，过滤，再加入甲醛2ml。

将A和B液混合，反复搅拌后放置30分钟，过滤后可使用。染色时间37℃　2-3小时，45℃　1-2小时。

该试剂可将内分泌颗粒和APUD细胞颗粒显示出来，同时也可把肌肉和神经等显示出来。