活化琼脂糖凝胶6FF

本公司出品的活化琼脂糖凝胶6FF，可用于偶连小分子、中性或碱性蛋白及多糖。与常见的溴化氰活化的琼脂糖凝胶相比，它有以下的优点：

1．有长短更适合的亲水结合臂，无杂吸附。

2．偶联的配基稳定，脱落量少，使用寿命长，没有毒性。

3．该方法活化的琼脂糖凝胶无离子交换作用，故其死吸附少，分离效果更好。

4．琼脂糖凝胶机械强度较高，不会出现装柱时体积被严重压缩，流速更快。

5．可偶联含有-OH，-SH或-NH2的配基，使用范围广。

介质特性：

应用实例：偶联牛血清白蛋白（BSA）

1、称取活化琼脂糖凝胶10g，加入50ml纯水混匀浸泡10min；

2、在砂芯漏斗上用200ml纯水分三次抽滤清洗（也可以用一般的抽滤器，清洗的比例

是每克干胶50ml纯水）；

3、取BSA400mg溶解于0.5M碳酸钠溶液中，溶液pH11，总体积20ml；

4、将溶解后的BSA溶液与洗净的凝胶混合，在摇床上水浴振荡，25℃偶联24小时；

5、偶联了BSA的凝胶在砂芯漏斗上抽干，然后用50ml纯水分三次抽滤清洗，收集清洗液测定BSA的含量，再用100ml纯水分三次抽滤清洗至pH为中性，最后将凝胶置于20%乙醇中保存。

6、BSA的吸附载量计算方法：BSA的吸附载量=（G0—G1）/V。

G0：BSA总使用量，单位：mg。

G1：偶联反应后未偶联的BSA的量，单位：mg。

V：填料的体积，单位：ml。

附录

1.该偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白，均能获得很好的偶联效果。

2.偶联的物质如果是小分子的例如氨基酸或其他带-NH2、-SH、-OH等基团的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05MNaOH中配置成10-20mg的溶液，其他条件不变。也可以提高偶联的温度，这样可以偶联密度更高。

注意事项

1、本产品溶胀后应立刻偶联配基，以免时间过长造成基团开环，降低偶联效率。

2、如果待偶联的蛋白不稳定，可降低偶连温度（最低到4℃），延长偶连时间（可延长至48h），以维持配基的活性。

3、偶联配基后应尽快清洗凝胶，避免在高pH条件中，配基失活。

4、更稳定的配基可以直接溶解于NaOH溶液中进行偶联，温度可升至40℃，偶联时间则相应缩短至10-16小时。

5、偶联蛋白的最适pH为11左右，在室温或4℃均可，温度与pH的提高均能增加配基的吸附载量，待偶联蛋白溶液的最适浓度为5-10mg/ml。

6、偶联的缓冲液可以包括碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的物质。

7、在偶联中不能用磁力搅拌器，免得破坏琼脂糖凝胶。

8、若要偶连的蛋白量较少，可以适当减少偶连缓冲液的体积，最少可以达到10ml凝胶用10ml配基缓冲液偶连，但不要降低其中的配基浓度，蛋白类最少不应低于5mg/ml。

9、偶连过程中应保证振荡的充分性，推荐使用三角烧瓶，如果微量时在试管中偶连，请将试管平放以使振荡充分。