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免疫组化封闭血清的选择和使用
双击自动滚屏 发布者:百浩生物 发布时间:2010-11-4 阅读:12073

做免疫组化时,一般都会封闭。以减少假阳性。

封闭主要是用于封去切片上一些非特异性吸附。用一种非特异性的蛋白,把那些容易吸附蛋白的空间和位点占起来,这样,加上抗体时,抗体只能与对应的抗原去结合了。

一般封闭可以用5%BSA,这个价格便宜,而且效果还行。但理论上,用与二抗同来源的正常血清会更好。

比如,一抗为国产的兔抗IL-2,二抗用标记的羊抗兔IgG。那么,封闭血清就选择与二抗同来源的正常羊血清(一般为山羊)。而同理,如果一抗为羊抗IL-2,二抗可以选标记的兔抗羊IgG,封闭血清选择正常兔血清。

使用时,可以用PBS将正常血清稀释20倍。直接滴加在切片上。37   10-30分钟。直接甩掉,不洗,轻轻的吸一下旁边的液体,再加一抗。听说4℃过夜比起37℃两小时背景会干净一些。当然,时间也会长一些。

关于抗体质量,我觉得国产的二抗质量还是不错的,比起进口的来丝毫不差,但一抗,也许种类太多,我们要努力的路还很长。虽然有很多进口的二抗是国内给加工的,而且还不少,但相对抗体的种类还说,还是很少。

 
 

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