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关于0.1M PBS配方的问题
双击自动滚屏 发布者:百浩生物 发布时间:2010-11-30 阅读:47342

要谈0.1M PBS,我们可以先谈一谈0.01M PBS。因为0.01M PBS是比较清楚,没什么争论的。一般用于免疫组化的0.01M PBS配方为:NaH2PO4•2H2O 0.2964gNa2HPO4•12H2O   2.9gNaCl 8g。如果用于细胞培养,可以用这个配方:NaCl 8.00Na2HPO.12H2O 2.90KCl      0.2KH2PO4 0.24。大家可以看出,同样是0.01M PBS,但他们两的配方并不完全一样,不过,这个是可以理解的,做细胞培养,当然是要很好的保证细胞的活性,尽可能的保证所处的环境。而后一个配方加入了K,就是为了维护Na/K平衡。而前一个配方,只是做免疫组化,细胞已经固定过的,也就不谈什么活性不活性了,只要细胞不变形就OK了。因而维护Na/K平衡就没有必要了。因而一切从简。当然了,用后一个配方做免疫组化行不行呢?当然是一点问题都没有。而如果用前一个配方高压后用于细胞清洗,行与不行,本人没有测试过,但为了保险起见,还是算了。

我们看一看这两个配方,NaCl占主要成分,维持渗透压,而HPO4/ H2PO4当然是维持PH值了。这个0.01M是什么意思?NaCl浓度为8/58.5=0.13675MHPO4浓度为2.9/358.14= 0.0081MH2PO4浓度为0.2964/156.01= 0.0019M。大家一看这个结果就知道,0.01M是指磷酸根浓度。

如此类推,那个0.1MPBS的配方就应该是NaH2PO4•2H2O 2.964gNa2HPO4•12H2O   29gNaCl 8g。用于细胞培养目前倒没听人说要用0.1MPBS,所以在此就不做讨论。

这样一推算,感觉0.1M PBS也很简单,但是,我百度或者谷歌0.1M PBS的配方,都没有找到我所推论出的配方,找到的几页也都是关于0.1M PBS的应用。这个怪了,也许是国家保密配方吧(开个玩笑)。

这个0.1M PBS配方的错误之处在于渗透压。、

我们简单的计算一下渗透压。πV=nRT 或π=cRT (式中π为稀溶液的渗透压,V为溶液的体积,c为溶液的浓度,R为气体常数,n为溶质的物质的量,T为绝对温度)。这个东东算起来比较麻烦,简单点说就是,渗透压与总离子浓度(摩尔浓度)成正比。

看看生理盐水,总浓度为2*9/58.5=0.307692308M

再看看0.01M PBS总离子浓度为0.13675*2+0.0081*3+0.0019*2=0.3016M

再看看0.1M PBS 总离子浓度为0.13675*2+0.081*3+0.019*2=0.2735+0.243+0.038 =0.5545M,这个与生理盐水差老远了。因而用这个去做免疫组化或者去配多聚甲醛,就有点问题了。

浓度高了,当然是减少一些NaCl了。0.307692308(标准生理盐水)-(0.243+0.038)/ 2=0.0260.026/2*58.5=0.78g

修正后的0.1M PBS配方为NaH2PO4•2H2O 2.964gNa2HPO4•12H2O   29gNaCl 0.78g

假如不加最后一点NaCl,总离子浓度为:0.081*3+0.019*2=0.281M。这个浓度与理盐水0.307692308M相关8.7%,而与0.01M PBS相差6.8%。因而我个人认为,对于体外的死细胞而言,这个差别不是特别大。所以传言的0.1M PBS的关相应用应该是笔误。应该是0.1M PB

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